摘要：目的：建立牛黄解毒片中微量砷的测定方法。方法：采用微波消解样品，氢化物原子吸收法测定砷含量。结果：本法检出限为0.035μg/Kg，变异系数CV=4.6%，回收率为90～106%。结论：该方法简单快速，灵敏度高，可作为中药制剂牛黄解毒片中微量砷的测定方法。
关键词：微波消化; 氢化物原子吸收法; 中药制剂；牛黄解毒片; 砷
砷是一种有害的重金属元素，经常摄入微量的砷化合物，会严重危害人们的
身体健康，因此砷是中药制剂卫生质量控制中的一种重要元素。尤其是对于含有雄黄类制剂的中成药，砷盐检查尤为必要。牛黄解毒片是常用中成药之一 ,具有镇惊安神，祛风豁痰之功效。收载于《中国药典》2010年版一部[1],其组方含有的雄黄成分，药典工艺中要求直接加入雄黄粉末，混匀压片而成,牛黄解毒片原标准中只收载了三氧化二砷的检查项目，以砷斑颜色深浅进行质量控制，未对砷斑作具体含量限度要求。为了保证人民用药安全有效、完善质量标准,建立砷含量的测定方法尤为必要[2-3]。本文对制剂中的雄黄成分进行了定量分析,对可溶性砷 (AS2O3 )做了检查,介绍如下。
仪器、试剂与样品
1.1 仪器
由美国热电公司生产的SOLAAR–S4原子吸收光度计以及VP90氢化物反应器；由上海新仪微波化学科技有限公司生产的MK-Ⅲ型压力自行控制微波密闭消解系统。
1.2 试剂
工艺超纯的HNO3；HCl、H2O2为纯优级；硼氢化钠、抗坏血酸、NaOH、碘化钾全部为分析纯；砷的标准液来自上海计量测试技术研究所。
1.3 样品
实验样品牛黄解毒片由菏泽健民药业有限公司提供。批号：130206-130216
2 分析步骤
2. 1溶液标本的制备
取牛黄解毒片适量，研碎，精确称取0.5～1.0g，于50ml溶样杯中，加入硝酸10.0 ml，进行加热，缓慢升温到达150℃。棕黄色烟雾完全散发后，取下稍冷，加入35%的 H2O21.0ml，加热15分钟，冷至室温，进行密封，并将标本溶液样品杯置于消解罐内，按消解炉的操作步骤进行由2档~4档的压力调节（2.0MPa），消解30分钟后取出（若消解未完全消失，可适当进行时间的延长）。冷却至室温，打开杯盖，进行160℃的加热并蒸发至液体仅剩0.6ml左右，再用10ml去离子水分两次进行溶样杯的冲洗，每次均放置在160℃的电热板上进行加热并蒸发至液体仅剩0.6ml左右，冷却后将样品移至50ml聚丙烯量瓶中，加入5ml 30%碘化钾-4%抗坏血酸混合液，再加入5ml盐酸，用水进行定容到达刻度，摇匀，100℃水浴加热15分钟，空白试剂制法同上。
2. 2标准溶液的制备
抽取1.000g/L浓度的适量砷标准液备用，用0.5% HNO3稀释到浓度为100.0μg/L的砷标液，分别吸取0.0、0.25、0.50、0.75，1.0、2.0ml的砷标液置于25ml量瓶中，加进30%碘化钾~4%抗坏血酸混合液2.5ml，再加入2.5 ml盐酸，用水稀释至刻度，100℃水浴加热10分钟，得到浓度分别为0.0、1.0、2.0、4.0、8.0μg/L的砷标准液。
2. 3测定
原子吸收光度工作系数为：波长测定值为192.8nm，灯电流 10mA，狭缝（通带）1.0nm，关闭背景校正。氢化物的条件：氢化物模式指的是火焰进行加热，火焰是乙炔~空气，燃气量为0.8L/min，燃烧高度在10.0～15.0mm之间，稳定延时100秒，达到基线延时80s，氩气流量为180ml/min。用10%HCl作为载液，还原剂为0.8%硼氢化钠(用0.2% NaOH溶液稳定)，在氢化物发生器上分别进行砷标准液以及样品液的吸光度的测定，使用线性最小二乘法绘制标准曲线，同时测得样品中砷的含量。
3 结果与讨论
3.1微波消化条件的选择
中药制剂中，少的只有几味药材，多的则有几十味药材，成分复杂并且不易分解完全，这给样品的消化处理带来了较大的困难，尤其是在消化的过程中样品的基体组成以及被测元素的性质，分解效果，反应后得出的不同可溶性盐，所用酸引入空白值，反应的速率等情况来均全面考虑。微波样品制备中使用的HNO3，HCl，磷酸，H2O2，高氯酸，H2SO4，氢氟酸作为溶剂，以增加有机物质的样品氧化剂氧化，则必须选择合适的混酸基，混合酸的合理比例，因为每个酸是唯一有效的单个矩阵的分解，所述酸的混合效果可以是互补。在溶剂中形成与另一种酸的复合样品的过程中有效溶解。实验中所用的低空白值作为超纯硝酸和过氧化氢的消化过程中添加了一个洁净样品的消解溶剂，砷盐的含量作为标准方法，以提高控制。
3.2选择预还原剂
经氢化物发生方法测定的砷元素为三价砷，因此须先将五价的砷还原到三价。相关文献资料记载[4]，本研究选择的预还原剂为30%碘化钾~4%抗坏血酸混合溶液，实验结果证实以30%碘化钾~4%抗坏血酸混合溶液为预还原剂，加入10.0%效果佳。
3.3 硼氢化钠浓度及酸的影响
反应体系中的硼氢化钠的浓度和酸度是影响氢化物反应的重要因素。硼氢化钠的浓度对砷的测定影响较大，如果硼氢化钠浓度太高，反应会产生大量的氢气对砷产生稀释作用降低其灵敏度；如果硼氢化钠浓度太低，氢化物会发生不完全反应降低灵敏度，结果证实硼氢化钠的浓度为1.0%时砷的灵敏度佳。氢化物反应适宜在酸性条件下进行，一般常用HCl或H2SO4来调节反应体系的酸度，本组实验选用HCl，试验表明，HCl浓度为10%时，反应条件最佳，砷灵敏度佳。
3.4 共存阳离子的影响
通过使用氩气进行砷化氢的载出，在溶液中残留干扰物质，因此共存的阳离子间相互影响较小。对于1.5μg /L砷，10mg/L的铜离子、铁离子、镍离子、铅离子、镉离子及钙离子对测定影响几乎为零[4]。
3.5 共存酸的影响
如果样品消化即进行测量，未赶酸，残留的HNO3会让碘析出，污染测定系统，试验会终止。因此，微波消融后，必须要将消融液中残留的HNO3赶出，否则会造成结果误差。在测定液中HNO3浓度小于0.06mol/L时，对测定产生的影响小，如果大于此浓度，测定结果会产生较大的误差[5]。
3.6 标准工作曲线
浓度在0~8.00μg/L范围内，按照吸光度的不同对砷的含量进行测定并绘制标准曲线，使用最小二乘法算出回归方程为：Y=0.0244X+0.0042，γ=0.9934，表示出其线性关系佳。
3.7 精密度检测试验
取同一批牛黄解毒片 (牛黄解毒片,130206批)，按照供试品溶液进行平行制备，共计6份，在氢化物的发生器中分别进行砷含量的测定，结果见表一。
表一 精密度试验
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序号 砷含量 平均含量 RSD
（mg/Kg） （mg/Kg） （％）
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1 0.023
2 0.036
3 0.032 0.030 4.6
4 0.026
5 0.028
6 0.030
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砷的含量平均值为0.030 mg/Kg，标准差值为0.0049，变异系数为4.6%。
3.8 回收率试验
精密称取已知含量的样品(牛黄解毒片,130206批)0.4g，分别加入已知浓度的对照品溶液，同供试品溶液制备方法处理样品并测定砷的含量，结果见表二。
表二 加样回收试验结果
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样品中已知量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD
（μg） （μg） （μg） （％） （％） （％）
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0.03408 0.029 0.06332 96.8
0.03371 0.031 0.07743 90.1
0.03434 0.035 0.06976 101.2 97.9 6.2
0.03370 0.032 0.06459 94.0
0.03390 0.043 0.08058 106.7
0.03324 0.042 0.07474 102.4
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3.9 检出限
计算出测定了10次的标准空白液的3倍标准差，检出极限值为0.035μg/Kg。
3.10 结论
本文建立了微波消化-氢化物原子吸收的方法测定中药制剂牛黄解毒片中砷含量，方法简便快捷，灵敏度高，线性关系较好，精密度较高，回收率达痕量测定值，为中药制剂牛黄解毒片中测定砷含量提供了一种行之有效的方法。
参考文献
[1]杨志强,李凤艳,李庆杰等.砷斑法测定砷含量[J].北京石油化工学院学报,2005,13(2):57-60.
[2]徐智,俞珊珊,黄可龙等.牛黄解毒片中不同单味组分对雄黄可溶性砷含量影响的比较研究[J].中国生化药物杂志,2009,30(2):121-123.
[3]张建平.几种中成药中砷的含量和形态分析及其体外生物可利用度研究[D].厦门大学,2008.
[4]范全民.原子吸收分光光度法测定牛黄解毒片中的三氧化二砷含量[J].中国药品标准,2013,14(1):24-25.
[5]董菊.牛黄解毒片的遗传毒性研究及其方药配伍减毒作用初探[D].南京中医药大学,2012
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